高灵敏度高特异且低背景干扰的非洲猪瘟快速筛查体系
高灵敏度高特异且低背景干扰的非洲猪瘟快速筛查体系 TOROIVD® ASFV-VP72 Gene qPCR Detection Reagent Set IV |
特别说明: 1. 本品仅限于科学研究及实验室自检,不可直接用于兽医诊断。
2. 本试剂组中无阳性、阴性质控品,如有需求,请联系洽谈。
3. 请注意模板稀释采用无酶 PCR 水或 TE 缓冲液,切勿使用生理盐水稀释模板。
4. 请在室温条件加样,请勿在冰上配置反应体系。
5. 在反应液液面下添加模板,可以减少模板损失,有助于提高对低拷贝模板的检测灵敏度。
6. 加模板后,需要用手指轻弹等轻轻混合反应液,促使体系混合,以免基线不平。
高灵敏度: 使用高灵敏TOROIVD® 5G 聚合酶结合专门针对非洲猪瘟优化的引物探针体系,具有行业领先的超高灵敏度,最大避免了非洲猪瘟检测的漏检率;其性能已得到客户大量验证。
高准确度: 采用UNG/dNTP 防污染系统,防止扩增产物气溶胶污染,最大避免了扩增假阳性;采OIE权威的高特异引物和探针序列。
低基线扰动: 经过反应体系优化,提高了对耗材和设备的通用性和兼容性,最大降低了基线的扰动性,防止检测结果误判。
高稳定性: 37℃热加速 15 天检测性能几乎不变,30 天仅降低 0.5 个 Ct 值;方便存储和运输。
操作简便: 2-8℃保存室温融化时间短;qPCR 预混液和引物探针配制简单,仅需 2:1 混合即配成荧光定量 PCR 反应液。
1. TS-ASFV-04与A集团客户使用的国产T品牌检测灵敏度比较
表1 TS-ASFV-04与T品牌反应体系灵敏度比较
Table 1 Sensitivity comparison between TS-ASFV-04 and Brand T
样品编号 | A集团T品牌体系 | TS-ASFV-04 | Cq差值 |
01 | 32.31 | 31.8 | -0.51 |
02 | 34.78 | 33.74 | -1.04 |
03 | 33.95 | 32.92 | -1.03 |
04 | 34.31 | 33.09 | -1.22 |
05 | 38.7 | 37.17 | -1.53 |
06 | 32.19 | 31.13 | -1.06 |
07 | 32.75 | 32.18 | -0.57 |
08 | 36.08 | 35.2 | -0.88 |
09 | 31.65 | 31.51 | -0.14 |
10 | 38.31 | 39.37 | 1.06 |
11 | 36.3 | 34.71 | -1.59 |
12 | - | 38.57 | - |
13 | - | 37.53 | - |
14 | 36.39 | 35.14 | -1.25 |
15 | 38.25 | 37.58 | -0.67 |
16 | 38.5 | 36.77 | -1.73 |
阴性对照 | 阴性 | 阴性 | - |
阳性对照 | 25.14 | 25.03 | -0.11 |
检出率 | 87.5%(14/16) | 100%(16/16) |
使用TS-ASFV-04检测体系与A集团使用的国产T品牌的非洲猪瘟检测体系,对16份低拷贝阳性样品进行检测,结果发现ASFV-04检测体系的检出率为100%,比A集团原来使用的国产T品牌检测体系的检出率 (87.5%)更高,说明TS-ASFV-04具有更高的灵敏度,可降低非洲猪瘟漏检的风险。
2. QPT-200U与多竞品在B集团的梯度稀释检测限比较
使用仪器:西安天隆 Gentier48E
使用体系:QPT200U+B集团引物探针组合
表2 QPT-200U与多竞品最低检出限比较
Table 2 Comparison of LOD between QPT-200U and other competitive products
稀释倍数 | TOROIVD | 进口T品牌 | 国产N品牌 | 国产T品牌 | 国产K品牌 | |||||
20 | 30.40 | 29.66 | 31.91 | 32.11 | 34.69 | 35.63 | 36.60 | 36.00 | 33.75 | 33.65 |
21 | 32.73 | 32.93 | 33.75 | 33.79 | 36.65 | 36.67 | 38.70 | 39.35 | 34.82 | 33.32 |
22 | 34.29 | 33.61 | 34.68 | 35.14 | 37.11 | 35.60 | 38.81 | 39.22 | 35.57 | 37.43 |
23 | 35.13 | 35.74 | 35.40 | 35.79 | 37.79 | 39.00 | 39.29 | 37.83 | 36.85 | 38.07 |
24 | 35.79 | 36.55 | 37.94 | 37.94 | 39.55 | 39.86 | 38.55 | 40.53 | 37.55 | 37.07 |
25 | 39.56 | 38.00 | 36.15 | 36.72 | - | 40.32 | - | 39.28 | ||
26 | 36.79 | 36.82 | - | 38.00 | - | 40.29 | ||||
27 | 38.61 | 37.62 |
结果如表2所示,最低检出限(LOD) 顺序为:TOROIVD(27) > 进口T品牌(25) > 国产T品牌(24) > 国产K品牌(24) > 国产N品牌(24)。从而可以看出TOROIVD与行业其它多个竞品相比,具有领先的最低检出限,最大程度避免非洲猪瘟漏检。
3. TS-ASFV-04与T品牌无模板对照的基线扰动对比
使用仪器:Step One Plus
使用耗材:0.1mL乳白PCR管(图1-a);0.1mL透明PCR管(图1-b)
图1 TS-ASFV-04与T品牌基线扰动性比较
Fig.1 Comparison of the baseline noise between TS-ASFV-04 and Brand T
采用不加模板的NTC对照,对比未优化引物探针的和优化过的TS-ASFV-04,与T品牌的反应体系比较;结果发现经过优化的TS-ASFV-04和T品牌相比,具有更好的耗材兼容性;在Step One Plus仪器上,无论在透明的0.1mLPCR管还是在乳白色的0.1mLPCR管中基线扰动都很小,从而防止结果误判。
4. TS-ASFV-04与国产T品牌扩增曲线对比
使用仪器:ABI Step One Plus
使用耗材:0.1mL乳白PCR管(图2-a,c);0.1mL透明PCR管(图2-b,d)
图2 TS-ASFV-04与T品牌扩增曲线对比
Fig.1 Comparison of the amplification curve between TS-ASFV-04 and Brand T
结果:发现在0.1mL乳白PCR管中TS-ASFV-04比T品牌扩增曲线要好,且检出率要高,且在乳白管中T品牌产生异常曲线,容易发生误判(图2-a,c)。在0.1mL透明PCR管中TS-ASFV-04和T品牌扩增曲线扩增曲线都不错,但检出率TS-ASFV-04更高(图2-b,d)。
结论:TS-ASFV-04和T品牌相比,具有更好的耗材兼容性;不仅曲线平滑,且灵敏度更高。
3. TS-ASFV-04的37℃热加速稳定性
图3 TS-ASFV-04经37℃热加速15天和30天的稳定性变化
Fig. 3 Thermal Stability of TS-ASFV-04 for 15 and 30 days
结果: TS-ASFV-04经过37℃热加速15天后和-20℃保存的性能无差异(图3-a),经过37℃热加速30天后和-20℃保存的相比,仅落后0.5 Ct(图3-b)。
结论: TS-ASFV-04可在15天内室温进行运输,可与2-8℃进行保存,降低了运输成本和使用简便性。
本产品中使用高速高灵敏的 TOROIVD® 5G 聚合酶,具有极高的灵敏度和扩增效率。结合世界动物卫生组织(OIE)公布的高特异引物和探针序列经过调优组合,可用荧光定量 PCR法对低至 1-3copies/反应的非洲猪瘟病毒进行高速超灵敏检测,最大程度降低了检测假阴性。同时反应体系使用高性能 UNG 防污染系统,最大程度降低检测假阳性。
本试剂组产品货号: TS-ASFV-04, 包含 500头份用量的荧光定量 PCR 预混液及引物探针混合液,不含内参。
组分货号 | 组分名称 | 包装规格 | 数量 | 保存温度 |
QPT-200U-WS | TOROIVD® 5G qPCR Premix with UNG-WS- (中文名:天筛®防污染 qPCR 预混液) | 1.25mL/管 | 4 管 | 2-8℃ 保存一年 |
TS-PPM-A04 | TOROIVD® ASFV-VP72 Primer&Probe Mix IV (中文名:天筛®非瘟 VP72 反应液IV) | 1.25ml/管 | 2 管 | 2-8℃ 避光保存一年 |
本试剂组产品货号: TS-ASFV-04V, 包含 500头份用量的荧光定量 PCR 预混液及引物探针混合液,含猪内参基因。
组分货号 | 组分名称 | 包装规格 | 数量 | 保存温度 |
QPT-200U-WS | TOROIVD® 5G qPCR Premix with UNG-WS- (中文名:天筛®防污染 qPCR 预混液) | 1.25mL/管 | 4 管 | 2-8℃ 保存一年 |
TS-PPM-A04V | TOROIVD® ASFV-VP72+IC Primer&Probe Mix IV (中文名:天筛®非瘟 VP72 反应液IV) | 1.25ml/管 | 2 管 | 2-8℃ 避光保存一年 |
备注:以上两种产品可提供定制1.5mL/管全预混荧光PCR混合液,请来电咨询。
本试剂可在 2-8℃稳定保存一年, 无需-20℃保存。
本试剂使用冰袋运输,冰袋融化不影响性能,无需干冰运输。
若干冰运输或-20℃保存,使用前请恢复到室温,且完全融化后使用。
1. 问: 该试剂适用哪些种型号的仪器?
答: 已经验证的仪器包括Roche LightCycler 96,ABI Step One Plus,西安天隆 Gentier 96R和Gentier 48E,杭州博日LineGene 9600 Plus, Biorad CFX 96,ABI QuantStudio 1,杭州柏恒Q1600及宏石SLAN-96S 等实时荧光定量PCR检测系统;其它仪器未验证,我们可以配合验证。
2. 问: 能否兼容其它试剂的循环条件?
答: 我司试剂能兼容绝大部分其它试剂的循环条件,但是要来电咨询是否可以完全替代。
3. 问: 能否兼容其它快速仪器的快速循环条件?
答: 我司能兼容绝大部分快速循环条件,但是各个快速仪器的控制温度精度及采光有差异,请来电咨询协助微调优化。
4. 问:试剂可以在-20℃保存吗?
答:试剂在-20℃保存三年以上,但是每次使用时需要完全室温融化,不可有任何结晶,否则影响性能。所以为了使用方便,建议 2-8℃稳定保存一年。
5. 问:两种组分混在一起如何保存比较稳定?
答:当qPCR预混液 和引物探针Mix 按 2:1 混合后,建议直接分装成 15μL 到定量八连管内,此时将该含反应混合液的八连管2-8℃保存15天内完全不影响性能。
6. 问:为何要将样本缓缓注入到加到荧光定量 PCR 反应液液面以下?
答: 15uL荧光定量 PCR 反应液一般密度和和粘度比较大,当极低拷贝模板加到液面以下时,模板很容易被包裹。从而降低因PCR管吸附少量模板及挥发的影响,最大提高低拷贝的检出率。
7. 问:为何在某些仪器上荧光信号值比较低?
答:非洲猪瘟病毒检测最关键是检测灵敏度,防止试剂漏检;但是由于各仪器软件算法的差异,荧光信号值会有差异,但不影响灵敏度;另外该试剂为了保持超高灵敏的前提下,通过调低探针浓度使得阴性样本的基线非常平稳,防止结果误判。高引物探针浓度容易产生基线扰动,如果不考虑基线扰动,高荧光信号值的试剂请选择TS-ASFV-05试剂组。
TS-ASFV-04的客户应用案例
1. TS-ASFV-04 非洲猪瘟诊断试剂组IV 与市场上非洲猪瘟检测试剂盒(A试剂) 的灵敏度对比
2. TS-ASFV-04 非洲猪瘟诊断试剂组IV 与市场上非洲猪瘟检测试剂盒(B试剂) 的灵敏度对比
工厂地址: 江苏如东珠江路888号生命健康园20号楼
电话:+86-21-68030217/33782006/33782046
邮箱:market@toroivd.com