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  • TOROIVD® ASFV-VP72 Gene qPCR Detection Reagent Set IV
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    高灵敏度高特异且低背景干扰的非洲猪瘟快速筛查体系


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    高灵敏度高特异且低背景干扰的非洲猪瘟快速筛查体系





     高灵敏度高特异且低背景干扰的非洲猪瘟快速筛查体系


     TOROIVD® ASFV-VP72 Gene qPCR Detection Reagent Set IV

          特别说明: 1.  本品仅限于科学研究及实验室自检,不可直接用于兽医诊断 

                                        2.  本试剂组中无阳性、阴性质控品,如有需求,请联系洽谈。

                                        3.  请注意模板稀释采用无酶 PCR 水或 TE 缓冲液,切勿使用生理盐水稀释模板。

                                        4.  请在室温条件加样,请勿在冰上配置反应体系。

                                        5.  在反应液液面下添加模板,可以减少模板损失,有助于提高对低拷贝模板的检测灵敏度。

                                        6.  加模板后,需要用手指轻弹等轻轻混合反应液,促使体系混合,以免基线不平。



      高灵敏度: 使用高灵敏TOROIVD® 5G 聚合酶结合专门针对非洲猪瘟优化的引物探针体系,具有行业领先的超高灵敏度,最大避免了非洲猪瘟检测的漏检率;其性能已得到客户大量验证。

      高准确度: 采用UNG/dNTP 防污染系统,防止扩增产物气溶胶污染,最大避免了扩增假阳性;采OIE权威的高特异引物和探针序列。

      低基线扰动: 经过反应体系优化,提高了对耗材和设备的通用性和兼容性,最大降低了基线的扰动性,防止检测结果误判。

      高稳定性: 37℃热加速 15 天检测性能几乎不变,30 天仅降低 0.5 个 Ct 值;方便存储和运输。

      操作简便: 2-8℃保存室温融化时间短;qPCR 预混液和引物探针配制简单,仅需 2:1 混合即配成荧光定量 PCR 反应液。


     1.  TS-ASFV-04与A集团客户使用的国产T品牌检测灵敏度比较

           

    表1 TS-ASFV-04与T品牌反应体系灵敏度比较

     Table 1 Sensitivity comparison between TS-ASFV-04 and Brand T         

    样品编号

    A集团T品牌体系

    TS-ASFV-04

    Cq差值

    01

    32.31

    31.8

    -0.51

    02

    34.78

    33.74

    -1.04

    03

    33.95

    32.92

    -1.03

    04

    34.31

    33.09

    -1.22

    05

    38.7

    37.17

    -1.53

    06

    32.19

    31.13

    -1.06

    07

    32.75

    32.18

    -0.57

    08

    36.08

    35.2

    -0.88

    09

    31.65

    31.51

    -0.14

    10

    38.31

    39.37

    1.06

    11

    36.3

    34.71

    -1.59

    12

    -

    38.57

    -

    13

    -

    37.53

    -

    14

    36.39

    35.14

    -1.25

    15

    38.25

    37.58

    -0.67

    16

    38.5

    36.77

    -1.73

     阴性对照

    阴性

    阴性

    -

        阳性对照

    25.14

    25.03

    -0.11

        检出率

    87.5%(14/16)

    100%(16/16


      使用TS-ASFV-04检测体系与A集团使用的国产T品牌的非洲猪瘟检测体系,对16份低拷贝阳性样品进行检测结果发现ASFV-04检测体系的检出率为100%比A集团原来使用的国产T品牌检测体系的检出率  (87.5%)更高,说明TS-ASFV-04具有更高的灵敏度可降低非洲猪瘟漏检的风险。


    2. QPT-200U与多竞品在B集团的梯度稀释检测限比较

      使用仪器:西安天隆 Gentier48E 

      使用体系:QPT200U+B集团引物探针组合


    表2 QPT-200U与多竞品最低检出限比较

    Table 2 Comparison of LOD between QPT-200U and other competitive products 

    稀释倍数

    TOROIVD

    进口T品牌

    国产N品牌

    国产T品牌

    国产K品牌

    20

    30.40

    29.66

    31.91

    32.11

    34.69

    35.63

    36.60

    36.00

    33.75

    33.65

    21

    32.73

    32.93

    33.75

    33.79

    36.65

    36.67

    38.70

    39.35

    34.82

    33.32

    22

    34.29

    33.61

    34.68

    35.14

    37.11

    35.60

    38.81

    39.22

    35.57

    37.43

    23

    35.13

    35.74

    35.40

    35.79

    37.79

    39.00

    39.29

    37.83

    36.85

    38.07

    24

    35.79

    36.55

    37.94

    37.94

    39.55

    39.86

    38.55

    40.53

    37.55

    37.07

    25

    39.56

    38.00

    36.15

    36.72



    -

    40.32

    -

    39.28

    26

    36.79

    36.82

    -

    38.00



    -

    40.29



        27

    38.61

    37.62









              

      结果如表2所示,最低检出限(LOD) 顺序为:TOROIVD(27) > 进口T品牌(25) > 国产T品牌(24) > 国产K品牌(24) > 国产N品牌(24)。从而可以看出TOROIVD与行业其它多个竞品相比,具有领先的最低检出限,最大程度避免非洲猪瘟漏检。


    3. TS-ASFV-04与T品牌无模板对照的基线扰动对比

      使用仪器:Step One Plus    

      使用耗材:0.1mL乳白PCR管(图1-a);0.1mL透明PCR管(图1-b)



    图1  TS-ASFV-04与T品牌基线扰动性比较

     Fig.1 Comparison of the baseline noise between TS-ASFV-04 and Brand T


      采用不加模板的NTC对照,对比未优化引物探针的和优化过的TS-ASFV-04,与T品牌的反应体系比较;结果发现经过优化的TS-ASFV-04和T品牌相比,具有更好的耗材兼容性;在Step One Plus仪器上,无论在透明的0.1mLPCR管还是在乳白色的0.1mLPCR管中基线扰动都很小,从而防止结果误判。


    4.  TS-ASFV-04与国产T品牌扩增曲线对比

      使用仪器:ABI Step One Plus    

      使用耗材:0.1mL乳白PCR管(图2-a,c);0.1mL透明PCR管(图2-b,d)



    图2  TS-ASFV-04与T品牌扩增曲线对比

    Fig.1 Comparison of the amplification curve between TS-ASFV-04 and Brand T 


            结果:发现在0.1mL乳白PCR管中TS-ASFV-04比T品牌扩增曲线要好,且检出率要高,且在乳白管中T品牌产生异常曲线,容易发生误判(图2-a,c)。在0.1mL透明PCR管中TS-ASFV-04和T品牌扩增曲线扩增曲线都不错,但检出率TS-ASFV-04更高(图2-b,d)。

            结论:TS-ASFV-04和T品牌相比,具有更好的耗材兼容性;不仅曲线平滑,且灵敏度更高。


    3. TS-ASFV-04的37℃热加速稳定性

        



      图3  TS-ASFV-04经37℃热加速15天和30天的稳定性变化

            Fig. 3  Thermal Stability of TS-ASFV-04  for 15 and 30 days



            结果:  TS-ASFV-04经过37℃热加速15天后和-20℃保存的性能无差异(图3-a),经过37℃热加速30天后和-20℃保存的相比,仅落后0.5 Ct(图3-b)。

            结论: TS-ASFV-04可在15天内室温进行运输,可与2-8℃进行保存,降低了运输成本和使用简便性。

      本产品中使用高速高灵敏的 TOROIVD® 5G 聚合酶,具有极高的灵敏度和扩增效率。结合世界动物卫生组织(OIE)公布的高特异引物和探针序列经过调优组合,可用荧光定量 PCR法对低至 1-3copies/反应的非洲猪瘟病毒进行高速超灵敏检测,最大程度降低了检测假阴性。同时反应体系使用高性能 UNG 防污染系统,最大程度降低检测假阳性。


      本试剂组产品货号: TS-ASFV-04,  包含 500头份用量的荧光定量 PCR 预混液及引物探针混合液,不含内参。


    组分货号

    组分名称

    包装规格

    数量

    保存温度

    QPT-200U-WS

    TOROIVD® 5G qPCR Premix with UNG-WS- 

    (中文名:天筛®防污染 qPCR 预混液)

    1.25mL/管

    4 管

    2-8℃

    保存一年

    TS-PPM-A04

    TOROIVD® ASFV-VP72 Primer&Probe Mix IV

    (中文名:天筛®非瘟 VP72 反应液IV)

    1.25ml/管

    2 管

    2-8℃

    避光保存一年

          本试剂组产品货号: TS-ASFV-04V,  包含 500头份用量的荧光定量 PCR 预混液及引物探针混合液,含猪内参基因。


    组分货号

    组分名称

    包装规格

    数量

    保存温度

    QPT-200U-WS

    TOROIVD® 5G qPCR Premix with UNG-WS- 

    (中文名:天筛®防污染 qPCR 预混液)

    1.25mL/管

    4 管

    2-8℃

    保存一年

    TS-PPM-A04V

    TOROIVD® ASFV-VP72+IC  Primer&Probe Mix IV

    (中文名:天筛®非瘟 VP72 反应液IV)

    1.25ml/管

    2 管

    2-8℃

    避光保存一年

           

         备注:以上两种产品可提供定制1.5mL/管全预混荧光PCR混合液,请来电咨询。



      本试剂可在 2-8℃稳定保存一年, 无需-20℃保存。

      本试剂使用冰袋运输,冰袋融化不影响性能,无需干冰运输。

      若干冰运输或-20℃保存,使用前请恢复到室温,且完全融化后使用。





    1. 问: 该试剂适用哪些种型号的仪器? 


     答: 已经验证的仪器包括Roche LightCycler 96,ABI Step One Plus,西安天隆 Gentier 96R和Gentier 48E,杭州博日LineGene 9600 Plus, Biorad CFX 96,ABI QuantStudio 1,杭州柏恒Q1600及宏石SLAN-96S 等实时荧光定量PCR检测系统;其它仪器未验证,我们可以配合验证。



    2. 问: 能否兼容其它试剂的循环条件?


    答: 我司试剂能兼容绝大部分其它试剂的循环条件但是要来电咨询是否可以完全替代



    3. 问: 能否兼容其它快速仪器的快速循环条件?


    答: 我司能兼容绝大部分快速循环条件,但是各个快速仪器的控制温度精度及采光有差异请来电咨询协助微调优化。



    4. 问:试剂可以在-20℃保存吗?


    答:试剂在-20℃保存三年以上,但是每次使用时需要完全室温融化,不可有任何结晶,否则影响性能所以为了使用方便,建议 2-8℃稳定保存一年。



    5. 问:两种组分混在一起如何保存比较稳定?


    答:qPCR预混液 和引物探针Mix 按 2:1 混合后建议直接分装成 15μ到定量八连管内此时将该含反应混合液的八连管2-8℃保存15天内完全不影响性能。



    6. 问:为何要将样本缓缓注入到加到荧光定量 PCR 反应液液面以下?


        答: 15uL荧光定量 PCR 反应液一般密度和和粘度比较大,当极低拷贝模板加到液面以下时,模板很容易被包裹。从而降低因PCR管吸附少量模板及挥发的影响,最大提高低拷贝的检出率



    7. 问:为何在某些仪器上荧光信号值比较低?


        答:非洲猪瘟病毒检测最关键是检测灵敏度,防止试剂漏检;但是由于各仪器软件算法的差异,荧光信号值会有差异,但不影响灵敏度;另外该试剂为了保持超高灵敏的前提下,通过调低探针浓度使得阴性样本的基线非常平稳,防止结果误判。高引物探针浓度容易产生基线扰动,如果不考虑基线扰动,高荧光信号值的试剂请选择TS-ASFV-05试剂组。




      TS-ASFV-04的客户应用案例


     1. TS-ASFV-04 非洲猪瘟诊断试剂组IV 与市场上非洲猪瘟检测试剂盒(A试剂) 的灵敏度对比

     2. TS-ASFV-04 非洲猪瘟诊断试剂组IV 与市场上非洲猪瘟检测试剂盒(B试剂) 的灵敏度对比


    TOROIVD® ASFV-VP72 Gene qPCR Detection Reagent Set IV.pdf   
    TOROIVD® ASFV-VP72 +IC qPCR Detection Reagent Set IV.pdf  

    TOROIVD® ASFV-VP72 Gene qPCR Detection Reagent Set IV (Premixed).pdf  


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