高灵敏高抗抑制防污染探针法qPCR预混液
高灵敏高抗抑制防污染探针法qPCR预混液 TOROIVD® 5G qPCR Premix BB with UNG |
特别说明: 本品仅限于科学研究及实验室自检,不可直接用于诊断。
TOROIVD® 5G qPCR Premix BB with UNG是一种可快速扩增的2×qPCR预混液,可进行五重qPCR分析。该预混液TOROIVD® 5G DNA聚合酶、dNTP、dUTP、UNG和反应缓冲液,最低可检测2-3拷贝的靶标DNA。突变5G聚合酶和缓冲液双重优化使得对PCR抑制剂具高抵抗能力,且在室温下具有高稳定性。该预混液采用dUTP/UNG防污染系统,可降低PCR产物的交叉污染风险。和QPT-200U相比,进一步优化缓冲液,大大提高了PCR抑制剂抵抗能力。
高速高灵敏:可使用探针法快速地检测低至2-3拷贝水平的DNA病毒或cDNA。
高抗抑制性:酶和配方的双重优化可耐受常见抑制PCR的物质(如肝素、血红素或EDTA)。
防污染系统:含有dUTP/UNG,可室温清除PCR扩增产物的污染。
室温稳定:在储存和运输过程中,性能不容易随温度变化而降低;完全室温配制体系。
兼容1-Step RT-qPCR:加入液体或冻干逆转录酶和RNase抑制剂预混液即可实现1-Step RT-qPCR。
1. 耐血液抑制:对体系5%的全血进行直接扩增,QPT-200U-BB比A品牌具有更高的抗抑制性能。
2. 组织裂解液直扩:取组织裂解液上清使用QPT-200U-BB进行扩增,无需核酸提取,扩增性能不变。
3. 兼容1-Step RT-PCR:在QPT-200U-BB种加入逆转录酶和RNase抑制混合物(RRM002),和QPR-303UD一步法RT-qPCR试剂盒具有同样性能。
名称:TOROIVD® 5G qPCR Premix BB with UNG(中文名:高速高灵敏防污染探针法qPCR预混液(直扩型))
货号: QPT-200U-BB
规格: 20µL×500次
组分货号 | 组分名称 | 包装规格 | 目录价 | 保存温度 |
QPT-200U-BB | TOROIVD® 5G qPCR Premix BB with UNG (中文名:高速高灵敏防污染探针法qPCR预混液(直扩型)) | 1.25mL×4管/包 | 1500元 | 2-8℃ 保存一年 |
试剂盒于-20℃长期保存,在 2℃-8℃可保存 1 年,使用前请完全融化
1. QPT-200U-BB热稳定性验证
以非洲猪瘟病毒B636L基因(编码VP72蛋白)的质粒为模板,以世界动物卫生组织公布的序列合成引物探针,采用分别37℃温控15天,30天的QPT-200U-BB进行扩增,以-20℃保存的QPT-200U-BB为对照,实验体系及程序按说明书推荐,结果如下图。
图1 QPT-200U-BB经37℃热加速15天的热稳定性比较 | 图2 QPT-200U-BB经37℃热加速30天的热稳定性比较 |
结果:QPT-200U-BB经过37℃热加速15天后和-20℃保存的性能无差异(图1), 经过37℃热加速30天后和-20℃保存的相比,仅落后0.5 Ct(图2)。
结论:QPT-200U-BB可在15天内室温进行运输,可与2-8℃进行保存,体现了极强的热稳定性,降低了运输成本,提高了使用简便性。
2. QPT-200U-BB抗抑制能力检测
以世界动物卫生组织公布的序列合成引物探针,剪取米粒大小(50mg左右) 猪组织样品置于含1mL裂解液(含5%TritonX-100 TE 缓冲液)的研磨管中,加入研磨珠在小型组织研磨器研磨3min;离心上清取5uL用QPT-200U-BB检测。实验体系及程序按说明书推荐,结果如下图。
QPT-200U-BB直扩性能验证
结果: QPT-200U-BB扩增结果曲线一致,表明结果正常。
结论:QPT-200U-BB在模板未经提取的情况下仍能正常扩增,体现了很强的抗抑制能力,可用于样品的直扩。
3. QPT-200U-BB 直扩性能检测
图4 QPT-200U-BB :猫孢疹病毒实际样品的直扩
采用客户提供实际猫孢疹病毒样品,以及客户提供的引物探针,采用QPT-200U-BB进行直扩,均能完整扩增,实验体系及程序按说明书推荐,结果如左图。
注:直扩反应中客户提供的样品保存液为市面上最通用的采样液,且样品稀释10倍所用稀释液也为客户提供采样液,表明QPT-200U-BB 在该方面具有很高的适应性。
结果: QPT-200U-BB正常扩增,且扩增曲线与原始曲线都保持一致。
结论:QPT-200U-BB在样品的直扩方面表现优异。
在直扩方面,若需达到最佳结果,可能需对反应进行优化,可联系本公司进行调优。
4. QPT-200U-BB多重PCR扩增检测
以客户提供实际样品为模板,以世界动物卫生组织公布的序列合成引物探针,用QPT-200U-BB检测非瘟/野毒/疫苗毒/内参,共四通道验证,实验体系及程序按说明书推荐,结果如下图:
图5 QPT-200U-BB扩增四重引物探针mix
结果: QPT-200U-BB扩增结果,四通道曲线正常,表明结果准确。
结论:QPT-200U-BB在四重引物探针作用下均能正常扩增,提高检测效率,表明QPT-200U-BB可用于多重PCR扩增。
工厂地址: 江苏如东珠江路888号生命健康园20号楼
电话:+86-21-68030217/33782006/33782046
邮箱:market@toroivd.com