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  • TOROIVD® 5G qPCR Premix BB  with UNG(QPT-200U-BB)
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  • TOROIVD® 5G qPCR Premix BB with UNG(QPT-200U-BB)

    高灵敏高抗抑制防污染探针法qPCR预混液

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    商品描述

    高灵敏高抗抑制防污染探针法qPCR预混液



    高灵敏高抗抑制防污染探针法qPCR预混液


     TOROIVD® 5G qPCR Premix BB  with UNG

          特别说明: 本品仅限于科学研究及实验室自检,不可直接用于诊断              


      

           TOROIVD® 5G qPCR Premix BB with UNG是一种可快速扩增的2×qPCR预混液,可进行五重qPCR分析。该预混液TOROIVD® 5G DNA聚合酶、dNTP、dUTP、UNG和反应缓冲液,最低可检测2-3拷贝的靶标DNA。突变5G聚合酶和缓冲液双重优化使得对PCR抑制剂具高抵抗能力,且在室温下具有高稳定性。该预混液采用dUTP/UNG防污染系统,可降低PCR产物的交叉污染风险。和QPT-200U相比,进一步优化缓冲液,大大提高了PCR抑制剂抵抗能力。


      高速高灵敏:可使用探针法快速地检测低至2-3拷贝水平的DNA病毒或cDNA。

      高抗抑制性:酶和配方的双重优化可耐受常见抑制PCR的物质(如肝素、血红素或EDTA)。

      防污染系统:含有dUTP/UNG,可室温清除PCR扩增产物的污染。

      室温稳定:在储存和运输过程中,性能不容易随温度变化而降低;完全室温配制体系。

      兼容1-Step RT-qPCR:加入液体或冻干逆转录酶和RNase抑制剂预混液即可实现1-Step RT-qPCR。 

          1. 耐血液抑制:对体系5%的全血进行直接扩增,QPT-200U-BB比A品牌具有更高的抗抑制性能。


          2. 组织裂解液直扩:取组织裂解液上清使用QPT-200U-BB进行扩增,无需核酸提取,扩增性能不变。 


          3. 兼容1-Step RT-PCR:在QPT-200U-BB种加入逆转录酶和RNase抑制混合物(RRM002),和QPR-303UD一步法RT-qPCR试剂盒具有同样性能。



      名称:TOROIVD® 5G qPCR Premix BB with UNG(中文名:高速高灵敏防污染探针法qPCR预混液(直扩型)

      货号:   QPT-200U-BB

      规格:   20µL×500次


    组分货号

    组分名称

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    QPT-200U-BB

    TOROIVD® 5G qPCR Premix  BB with UNG 

    (中文名:高速高灵敏防污染探针法qPCR预混液(直扩型))

    1.25mL×4管/包

    1500元

     2-8℃

    保存一年


      试剂盒于-20℃长期保存,在 2℃-8℃可保存 1 年,使用前请完全融化




     1. QPT-200U-BB热稳定性验证

      以非洲猪瘟病毒B636L基因(编码VP72蛋白)的质粒为模板,以世界动物卫生组织公布的序列合成引物探针,采用分别37℃温控15天,30天的QPT-200U-BB进行扩增,以-20℃保存的QPT-200U-BB为对照,实验体系及程序按说明书推荐,结果如下图。


    图1  QPT-200U-BB经37℃热加速15天的热稳定性比较 图2  QPT-200U-BB经37℃热加速30天的热稳定性比较

      

      结果:QPT-200U-BB经过37℃热加速15天后和-20℃保存的性能无差异(图1), 经过37℃热加速30天后和-20℃保存的相比,仅落后0.5 Ct(图2)。

      结论:QPT-200U-BB可在15天内室温进行运输,可与2-8℃进行保存,体现了极强的热稳定性,降低了运输成本,提高了使用简便性。


     2. QPT-200U-BB抗抑制能力检测

      以世界动物卫生组织公布的序列合成引物探针,剪取米粒大小(50mg左右) 猪组织样品置于含1mL裂解液(含5%TritonX-100 TE 缓冲液)的研磨管中,加入研磨珠在小型组织研磨器研磨3min;离心上清取5uL用QPT-200U-BB检测。实验体系及程序按说明书推荐,结果如下图。



    QPT-200U-BB直扩性能验证

      结果:  QPT-200U-BB扩增结果曲线一致,表明结果正常。

      结论:QPT-200U-BB在模板未经提取的情况下仍能正常扩增,体现了很强的抗抑制能力,可用于样品的直扩。


     3. QPT-200U-BB 直扩性能检测


    图4 QPT-200U-BB :猫孢疹病毒实际样品的直扩

      采用客户提供实际猫孢疹病毒样品,以及客户提供的引物探针,采用QPT-200U-BB进行直扩,均能完整扩增,实验体系及程序按说明书推荐,结果如左图。

      注:直扩反应中客户提供的样品保存液为市面上最通用的采样液,且样品稀释10倍所用稀释液也为客户提供采样液,表明QPT-200U-BB 在该方面具有很高的适应性。

      结果:  QPT-200U-BB正常扩增,且扩增曲线与原始曲线都保持一致。

      结论:QPT-200U-BB在样品的直扩方面表现优异。

      在直扩方面,若需达到最佳结果,可能需对反应进行优化,可联系本公司进行调优。


     4. QPT-200U-BB多重PCR扩增检测

      以客户提供实际样品为模板,以世界动物卫生组织公布的序列合成引物探针,用QPT-200U-BB检测非瘟/野毒/疫苗毒/内参,共四通道验证,实验体系及程序按说明书推荐,结果如下图:


    图5  QPT-200U-BB扩增四重引物探针mix

              结果:  QPT-200U-BB扩增结果,四通道曲线正常,表明结果准确。

              结论:QPT-200U-BB在四重引物探针作用下均能正常扩增,提高检测效率,表明QPT-200U-BB可用于多重PCR扩增。



    TOROIVD® 5G qPCR Premix BB  with UNG.pdf




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