随着MIQE逐渐推行，审稿人对qPCR论文的要求越来越高。科研人员在撰写qPCR数据论文时，要使用标准化的术语，从而降低论文修改的工作量。

如下术语是引用自GB/T42077—2022/ISO20395:2019，供科学研究人员发表论文使用。

1. 实时定量PCR quantitative real-time PCR ;qPCR

将特定的 DNA 片段进行体外扩增与利用荧光信号积累实时检测和定量扩增过程中特定 PCR产物相结合的聚合酶链式反应过程。

注: 当 PCR反应开始,进行特定 DNA 序列复制时,形成的荧光分子发出的荧光信号与存在的 DNA 量成正比(理论上可以通过反向计算来推断在起始模板中的特定 DNA 的原始量)。

[来源:ISO16577:2016,3.162,有修改]

2. 逆转录 reverse transcription;RT

在适当的条件下,逆转录酶利用一个或多个寡核苷酸引物由以 RNA 为模板合成cDNA 的过程。

[来源:ISO16577:2016,3.180,有修改]

3.逆转录qPCR reverse transcription qPCR; RT-qPCR

首先用逆转录酶将 RNA 链反转录生成与其互补的 DNA(互补 DNA 或cDNA),然后以合成的cDNA 为模板使用qPCR进行扩增的过程。

注1:这个过程可以是一步或两步。

注2: 在一步 RT-qPCR中,RT和qPCR扩增步骤是在同一管中用基因特异性引物按顺序进行的检测。

注3:在两步 RT-qPCR中,RT和qPCR阶段作为两个独立反应进行。在这种情况下,RT步骤可以使用非特异性引物(即寡核苷酸dT引物和/或随机寡核苷酸的混合物)从 RNA 样本中的所有转录本产生总cDNA。该cDNA 作为模板,加入基因特异性 PCR引物扩增目标序列,用于qPCR的后续分析。

[来源:ISO16577:2016,3.181,有修改]

4.扩增图 amplification plot

表示q CR反应过程中产生的报告基因的信号(通常为荧光信号)图。

5. 校准曲线 calibrate curve

    标准曲线 standard curve

示值与对应测得值之间的关系的表达方式。

[来源:ISO/IEC 指南99:2007,4.31,有修改]

6. 熔解曲线 melting curve

分析描述加热过程中 DNA 的双螺旋结构降解程度的曲线。

[来源:ISO16577:2016,3.107,有修改]

7. 定量循环 quantification cycle ; Cq

qPCR反应产生的荧光超越足以区分背景信号阈值时的循环数。

注1：定量循环是一个通用术语，包括循环阈值(Ct)、交叉点(Cp)、出峰点和所有其他仪器上提及的用于量化qPCR 分析中靶序列浓度的循环的特殊术语。

注2:定量循环是基于应用于所有样本的阈值,或基于每个样本的信号回归分析。

[来源:ISO16577:2016,3.32,有修改]

8. 定量循环差值  delta Cq；ΔCq

两个Cq 值之间的差值, ΔCq=Cq₍₁₎-Cq₍₂₎。

9.退火温度 melting temperature；Tm

由于 DNA 双螺旋是在一定温度范围内而不是在一个特定的温度下解离,当50%的双链 DNA 螺 旋解离时的温度即为退火温度。

[来源:ISO16577:2016,3.1.08]

10 . PCR效率 PCR efficiency ;E 

每一个 PCR循环扩增得到的产物的量与模板的比值。

示例: 若一个测试管含有100个靶标分子,且在一个PCR循环后含有180个分子,那么E=0.8。计算的扩增效率以1的百分比或分数表示,100%的效率相当于在一个循环中成倍扩增。

11.逆转录效率 reverse transcription efficiency

     RT效率 RT efficiency

参与逆转录反应中实际转化合成cDNA 的 RNA 模板的百分比。

示例:80%的逆转录效率是指80%的 RNA 模板转化为cDNA。

12. 线性 linearity

用一种方法分析描述一定范围内提供与在实验室样品中测定的核酸靶序列的浓度和仪器响应信号 或结果的能力成比例的关系。

注1:在qPCR中,循环阈值与核酸靶序列浓度的对数值成反比。

注2:线性这一术语通常与方法的线性范围联系在一起,指一种方法给出与核酸靶序列浓度成正比的响应或结果的能力。

[来源:ISO16577:2016,3.9.2,有修改]

13. 特异性 specificity

     分析方法的特异性 analytical specificity

测量程序仅测定其需要定量样品的能力。

示例:PCR检测特异性指的是其仅检测靶序列的能力,并且靶序列的定量不受相关或潜在干扰核酸或样本相关条件的交叉反应的影响。

[来源:ISO15193:2009,3.9,有修改]。

14.无模板对照 no template control; NTC

包含除核酸模板外所有试剂的对照反应。

注: 该对照用于证明无核酸污染。例如,无模板对照是在反应中加入相应体积的无核酸水来代替模板 DNA 进行反 应。有时也使用“PCR试剂对照”一词。

15. 逆转录阴性对照 RT minus control; RT(-)

除逆转录酶外,含有测试样品核酸模板和所有扩增试剂的 RT-PCR。

注:逆转录阴性对照用于定量 RNA 和测量样品中残余gDNA 产生的背景。

16.内参基因 reference gene

      内源基因 endogenous gene

靶基因在每个生物样本中几乎以恒定的拷贝数浓度存在,对生物或实验条件变化引起的反应波动不敏感,或在特定物种或种群内稳定。

注:内参基因过去被称为管家基因。然而,当测量 RNA 时,也可以使用许多不是管家基因的靶序列,因此现在优先使用的术语是内参基因。

17.目标基因 gene of interest;GOI

正在研究的基因靶序列。

18.信使 RNA messenger RNA; mRNA

作为模板指导蛋白质合成的一类核糖核酸亚型。

19.互补 DNA complementary DNA; cDNA

单链DNA,与模板 RNA 互补,在逆转录酶作用下合成的作为 DNA 扩增的模板。

20.模板 template

用于合成目标 DNA 或 RNA 链的互补碱基序列。

[来源:ISO16577:2016,3.206]

21.核酸总量 total nucleic acid

对样本进行核酸提取后得到的样品中核酸的总量,一般采用质量浓度表示。

注:在特定提取物中,核酸总量包含大多数种类(如 DNA 或 RNA)。

22.样本 sample

从总样或一批次样品中抽取的具有代表性的一小部分或少量样本。

[来源:ISO16577:2016,3.185]

23.测试样品 test sample

由全部或部分样品经过处理得到的用于测试或分析的样品。

[来源:ISO16577:2016,3.210]

24.校准品 calibrator

用于校准的测量标准。

注:术语“校准品”只用于某些领域。示例:在包含多个qPCR多孔板或者多次qPCR实验的研究中,通常会在每块多孔板中包含一个qPCR板间校准品, 以补偿由于仪器测量因素如基线和阈值设定导致的多孔板板间数据差异。板间校准品包含可由 PCR 分析检测到的靶序列,并以所研究的样品相同的 PCR分析方法进行测量。

[来源:ISO/IEC 指南99:2007,5.1.2,有修改]

25.靶序列 target sequence

    靶核酸序列 nucleic acid target sequence

被检测(如采用 PCR)的目的 DNA 序列。

[来源:ISO16577:2016,3.203]

26.扩增子 amplicon

利用 DNA 扩增技术(如聚合酶链式反应,PCR)产生的特定 DNA 片段。

[来源:ISO13495:2013,3.3.1]

27.拷贝数 copy number

含有特定核苷酸序列的分子(拷贝)数量。

[来源:ISO16577:2016,3.2.8,有修改]

28.PCR分析 PCR assay

用指定的寡核苷酸引物(在某些情况下,还包括一个或多个探针)鉴定和/或量化核酸靶序列的

qPCR的测量方法。

29.拷贝数浓度 copynumber concentration

单位体积内含有特定核苷酸序列的分子(拷贝)数量。

30.定量限 limit of quantification;LOQ

在规定的实验条件下,一定体积待测样中检测到的核酸靶序列的最低浓度或含量,该检测结果具有一定的准确度和精密度,可用于合理的统计分析。

注:通常用信号或测量(真)值表示,该值将产生具有特定变异系数(CV)的估计值。

[来源:ISO16577:2016,3.91,有修改]

31. 检出限 limit of detection;LOD

由给定的测量程序获得的测得值。其声称样品中不存在某种成分的误判概率为β,其存在某种成分的误判概率为α。

[来源:ISO/IEC 指南99:2007,4.18,有修改]

32.归一化 normalization

通过减去(Cq 标度)或除以(线性标度)反映非特定技术因素的一个或多个参数来修正核酸靶序列的测量结果。