
1. QPT-200热稳定性验证
以非洲猪瘟病毒B636L基因(编码VP72蛋白)的质粒为模板,以世界动物卫生组织公布的序列合成引物探针,采用分别37℃温控7天,14天的QPT-200进行扩增,以-20℃保存的QPT-200为对照,实验体系及程序按说明书推荐,结果如下图:
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图1 QPT-200经37℃热加速7天的稳定性比较 | 图2 QPT-200经37℃热加速14天的稳定性比较 |
结果: 由图,QPT-200经过37℃分别热加速7天和14天后与-20℃保存的性能无差异。
结论:QPT-200可在14天内室温进行运输,可与2-8℃进行保存,体现了极强的热稳定性,降低了运输成本,提高了使用简便性。
2. QPT-200抗抑制能力检测
以世界动物卫生组织公布的序列合成引物探针,剪取米粒大小(50mg左右) 猪组织样品置于含1mL裂解液(含5%TritonX-100 TE 缓冲液)的研磨管中,加入研磨珠在小型组织研磨器研磨3min;离心上清取5uL用QPT-200检测。实验体系及程序按说明书推荐,结果如下图:

图3 QPT-200直扩性能验证
结果:QPT-200扩增结果曲线一致,表明结果正常。
结论:QPT-200在模板未经提取的情况下仍能正常扩增,体现了很强的抗抑制能力,可用于样品的直扩。
3. QPT-200多重PCR扩增检测
以客户提供实际样品为模板,以世界动物卫生组织公布的序列合成引物探针,用QPT-200检测非瘟/野毒/疫苗毒/内参,共四通道验证,实验体系及程序按说明书推荐,结果如下图:

图4 QPT-200扩增四重引物探针mix
结果:QPT-200扩增结果,四通道曲线正常,表明结果准确。
结论:QPT-200在四重引物探针作用下均能正常扩增,提高检测效率,表明QPT-200可用于多重PCR扩增。