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QPT-200U-BB实验案例
来源: | 作者:toroivd | 发布时间: 2022-05-06 | 105 次浏览 | 分享到:

 1. QPT-200U-BB热稳定性验证

  以非洲猪瘟病毒B636L基因(编码VP72蛋白)的质粒为模板,以世界动物卫生组织公布的序列合成引物探针,采用分别37℃温控15天,30天的QPT-200U-BB进行扩增,以-20℃保存的QPT-200U-BB为对照,实验体系及程序按说明书推荐,结果如下图。


图1  QPT-200U-BB经37℃热加速15天的热稳定性比较 图2  QPT-200U-BB经37℃热加速30天的热稳定性比较

  

  结果:QPT-200U-BB经过37℃热加速15天后和-20℃保存的性能无差异(图1), 经过37℃热加速30天后和-20℃保存的相比,仅落后0.5 Ct(图2)。

  结论:QPT-200U-BB可在15天内室温进行运输,可与2-8℃进行保存,体现了极强的热稳定性,降低了运输成本,提高了使用简便性。


 2. QPT-200U-BB抗抑制能力检测

  以世界动物卫生组织公布的序列合成引物探针,剪取米粒大小(50mg左右) 猪组织样品置于含1mL裂解液(含5%TritonX-100 TE 缓冲液)的研磨管中,加入研磨珠在小型组织研磨器研磨3min;离心上清取5uL用QPT-200U-BB检测。实验体系及程序按说明书推荐,结果如下图。



QPT-200U-BB直扩性能验证

  结果:  QPT-200U-BB扩增结果曲线一致,表明结果正常。

  结论:QPT-200U-BB在模板未经提取的情况下仍能正常扩增,体现了很强的抗抑制能力,可用于样品的直扩。


 3. QPT-200U-BB 直扩性能检测


图4 QPT-200U-BB :猫孢疹病毒实际样品的直扩

  采用客户提供实际猫孢疹病毒样品,以及客户提供的引物探针,采用QPT-200U-BB进行直扩,均能完整扩增,实验体系及程序按说明书推荐,结果如左图。

  注:直扩反应中客户提供的样品保存液为市面上最通用的采样液,且样品稀释10倍所用稀释液也为客户提供采样液,表明QPT-200U-BB 在该方面具有很高的适应性。

  结果:  QPT-200U-BB正常扩增,且扩增曲线与原始曲线都保持一致。

  结论:QPT-200U-BB在样品的直扩方面表现优异。

  在直扩方面,若需达到最佳结果,可能需对反应进行优化,可联系本公司进行调优。


 4. QPT-200U-BB多重PCR扩增检测

  以客户提供实际样品为模板,以世界动物卫生组织公布的序列合成引物探针,用QPT-200U-BB检测非瘟/野毒/疫苗毒/内参,共四通道验证,实验体系及程序按说明书推荐,结果如下图:


图5  QPT-200U-BB扩增四重引物探针mix

          结果:  QPT-200U-BB扩增结果,四通道曲线正常,表明结果准确。

          结论:QPT-200U-BB在四重引物探针作用下均能正常扩增,提高检测效率,表明QPT-200U-BB可用于多重PCR扩增。


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