
1. 高温逆转录活性
以MS2 RNA为模板,稀释MS2 RNA到1000copies、100copies、10copies、1copies,设置一步法反应程序(仪器型号为博日LineGine9600),采用温度梯度设置从50-60℃的温度梯度。

图1 高温逆转录活性测试
Fig.1 Activity of reverse transcriptional test for high temperature
由图1可以看出,在1000copies模板浓度范围内,逆转录从50-60℃所得到的Cq值波动范围在1之内,说明该产品具有宽广的高温逆转录活性范围。
2.应用案例
以MS2 RNA为模板,稀释MS2 RNA到8ng及0.08ng两种添加量,用本产品逆转录,将逆转录产物稀释10倍后进行定量PCR扩增(ABI Step One Plus),对比进口T品牌的高灵敏逆转录酶,及不添加RNase抑制剂对反应体系的影响,如图2所示。

图2 扩增曲线
Fig.2 Amplification plot
由图2可以看出,反应体系中必须添加RNase抑制剂,否则会对Cq值具有很大影响;对比T品牌的试剂,本产品在低模板具有更好的逆转录效率,且△△Cq更接近理论值,即本产品更适合△△Cq法为基础的基因表达分析。