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TOROIVD® One Step Fusion Cloning Mix

一步无缝克隆预混液
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重量：1.00KG
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- 250uL
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商品参数

商品描述

一步无缝克隆预混液

TOROIVD^® One Step Fusion Cloning Mix

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

简单、快速、高效：可将插入片段克隆至任意线性载体的任意位点。

无需连接酶：无载体自连，阳性率可达95%以上。

无需考虑插入片段自身携带的酶切位点：无需考虑插入片段自身携带的酶切位点。

一次反应可完成单至多个片段重组：最快仅需5min完成单片段的重组。

无缝克隆是一种简单、快速并且高效DNA定向克隆技术，可将插入片段定向克隆至任意载体的任意位点。TOROIVD^® One Step Fusion Cloning Mix通过识别DNA片段和线性化载体末端15-20bp同源序列，50℃反应5-60 min即可将DNA片段和线性化载体高效精确地融合在一起，完成定向克隆，且克隆阳性率可达95%以上。

组分货号

组分名称

包装规格

数量

保存温度

FCM-050

2×One Step Fusion Cloning Mix

250μL/管

1 管/包

-20℃

可保存长期

本试剂请在-20℃条件下保存。

1. 问：转化效率低？

答：使用新制备或妥善保存的感受态细胞，按照说明书推荐的最适用量和比率配制反应体系，常用的吸光测量法易受DNA纯度、缓冲液pH值等因素影响，测定偏差较大，因此推荐使用琼脂糖电泳测定样品浓度；对载体和插入片段进行胶回收纯化。由于EDTA等金属离子螯合剂会抑制无缝克隆反应，因此纯化产物应溶解于ddH2O中，切勿使用Tris-EDTA等缓冲液；在转化体系中，无缝克隆反应产物体积不应超过感受态细胞体积的10%。

2. 问：大量克隆不含插入片段？

答：酶切制备线性化载体时，提高限制性内切酶使用量，延长反应时间，或使用胶回收纯化酶切产物，所以我们建议用高保真PCR扩增线性化载体；以质粒为模板进行插入片段PCR扩增时，使用预线性化质粒作为扩增模板，使用Dpn I (Cat NO.：DPN-050)等甲基化敏感型内切酶对扩增产物进行处理, 或对产物进行胶回收纯化；确保正确的抗生素，并使用新鲜制备的抗生素平板。

3. 问：大量克隆含有不正确插入片段？

答：优化PCR体系，提高特异性，或胶回收纯化PCR产物。