含去基因组功能逆转录试剂盒
含去基因组功能的高效逆转录试剂盒 TOROBlue® qRT Premix with gDNA Eraser 2.0 |
特别说明: 本品适用于荧光定量 PCR,如需普通 PCR 则逆转录产物不宜超过 1 kb。
卓越的逆转录效率:基于特殊改造地 M-MLV 逆转录酶,极大提高了逆转录效率。
高热稳定性:添加了酶稳定剂使得预混液保持很高的稳定性,方便室温配制反应体系,无需冰上操作。
一管式去基因组反应:科学加样设计,能够进行一管式去基因组反应,不仅可快速去除基因组污染,而且让后续定量结果更加可靠。
1. RTQ-202 与进口 T 品牌逆转录效率比较
使用 RTQ-202 和进口 T 品牌按照各自说明书推荐的体系和程序同时对 1 µg 的水稻 RNA 进行逆转录,后续使用 TOROGreen® qPCR Master Mix(QST-100)进行定量实验,扩增曲线如下图所示:
图1 RTQ-202与进口T品牌逆转录效率比较
Fig.1 Comparison of reverse transcription efficiency between RTQ202 and Brand T
结果:从扩增曲线中可以看到,RTQ-202 和进口 T 品牌对 1 µg 的水稻 RNA逆转录后进行定量实验的结果基本一致。
结论:RTQ-202 和进口 T 品牌具有同样高效的逆转录效率。
2. 人源基因组去除性能验证
使用 RTQ-202 的去基因组组分对 40 ng 的人源基因组 DNA 进行去基因组反应,后续使用 TOROGreen® qPCR Master Mix(QST-100) 进行定量实验,同时以不去基因组的同浓度人源基因组 DNA 进行定量作为对照,扩增曲线如下图所示:
图2 人源基因组去除性能验证
Fig.2 Validation of human genome removal performance
结果:从扩增曲线中可以看到,不添加去基因组组分的样本定量结果出现扩增,而添加了去基因组组分并进行去基因组反应的样本定量结果没有出现扩增。
结论:RTQ-202 的去基因组组分可完全清除 40 ng 的人源基因组 DNA。
TOROBlue® qRT Premix with gDNA Eraser 2.0 是含去除基因组 DNA 功能的 qPCR 用逆转录试剂盒。
名称:TOROBlue® qRT Premix with gDNA Eraser 2.0
货号:RTQ-202
规格:20μL/200次
组分货号 | 组分名称 | 包装规格 | 数量 | 保存温度 |
RTQ-202 | RNA Dilution Buffer | 1mL/管 | 2管 | -20℃ 保存两年 |
5×gDNA Eraser Mi | 300μL/管 | 2管 | -20℃ 保存两年 | |
5×qRT Premix Ⅱ | 400μL/管 | 2管 | -20℃ 保存两年 | |
RT Enzyme Mix | 100μL/管 | 2管 | -20℃ 保存两年 |
-20℃可保存两年。
1. 逆转录产物 cDNA 浓度能够反映逆转录效率吗?
答:不可以,逆转录产物 cDNA 中含有大量的蛋白和盐离子杂质,不能准确测定其浓度,也不能反应逆转录效率。
2. 逆转录产物 cDNA 必须稀释后进行定量实验吗?
答:一般 cDNA 每稀释 10 倍 CT 值增大 3.32,可根据该规律稀释 cDNA 使 CT 值落在目标区间。若不稀释进行定量实验时,cDNA 的添加量不能超过 qPCR 反应体系的 1/10,如 20 µL 体系中 cDNA 原液的添加量不应超过 2 µL,因为逆转录产物中包含抑制 qPCR 的组分,添加量过大时会抑制扩增。
3. CT 值的高低能否反映逆转录效率吗?
答:不能,逆转录效率应该通过对 RNA 梯度稀释后逆转录产物进行的定量标准曲线来反映。单纯的 CT 值高低并不能反映逆转录效率,比如,RNA 中残留的基因组 DNA 未能去除干净时会降低 CT 值。
4. RTQ-202 和其它市面荧光定量 PCR 检测试剂兼容性如何?
答:因各公司试剂系配方差异,优先推荐我司荧光定量 PCR 试剂盒系列包括 QST-100,QST-300 及 QET-100。兼容其它公司试剂盒时,请把 cDNA 稀释后使用且添加量不高于反应体系的 20%。
5. RTQ-202 的逆转录条件与市场竞品兼容使用?
答:RTQ-202 采用我公司进化改造的 TOROIVD® III Reverse Transcriptase,与市面竞品不同的是,该酶具有宽泛的高温逆转录活性,在 37℃-55℃ 之间的 CT 值差异在 0.5 之内。故 RTQ 系列兼容市面上绝大部分的反转录条件,可以在不改变原产品逆转录条件的情况下使用。
工厂地址: 江苏如东珠江路888号生命健康园20号楼
电话:+86-21-68030217/33782006/33782046
邮箱:market@toroivd.com