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    商品描述

    高效率高温逆转录酶






     

       高效率高温逆转录酶


       TOROIVD® Ⅲ Reverse Transcriptase



      TOROIVD® III Reverse Transcriptase是由M-MLV逆转录酶突变改造而来的高效率逆转录酶。去除了RNaseH活性,提高了延伸性、灵敏度、扩增效率和高温反应性。可应用于RT-qPCR、长片段cDNA克隆、cDNA文库构建、低拷贝RNA的cDNA合成。

      高灵敏度:配合TOROIVD® 5G DNA Polymerase系列使用,灵敏度可达3 copies/反应。

      宽范围逆转录活性:在37~60℃宽温度范围内具有一致的逆转录活性。

      高热稳定性:突变改造及稳定剂使得保存稳定,37℃孵育一周性能保持不变。

      1. 宽逆转录活性范围:

           以1、10、100、1000拷贝的MS2RNA为模板,使用RTM-002和QPT-200设置一步法RT-qPCR反应体系,采用温度梯度功能从37-62℃设置逆转录温度梯度,结果如图所示,在37-62℃逆转录温度下所得到的Cq值数值波动在1之内,说明RTM-002具有宽泛的高温逆转录活性范围。

      2. 高灵敏度:

           以0.5、5、50及500copies/μL的MS2RNA为为模板,在每25μL反应体系中添加5μL模板,配合MFP-207及RNase抑制剂进行一步法RT-qPCR,结果如图所示,即使低至2.5copies/反应的模板仍可稳定检出,说明RTM-002具有高灵敏度,可以进行低模板浓度病毒及mRNA的检测。

    组分货号

    组分名称

    包装规格

    目录价格

    保存温度

    RTM-002-10KU

    TOROIVD® Ⅲ Reverse Transcriptase

    10KU/0.1ML

    200元

    -20

    RTM-002-100KU

    TOROIVD® Ⅲ Reverse Transcriptase

    100KU/1ML

    1500元

    -20

      -20℃条件下可保存2年,2-8℃条件下保存1个月,避免反复冻融。


    █ RTM-002与T品牌逆转录性能对比

       实验材料:MS2RNA

                      TOROIVD #QST-100

                      TOROIVD #RTM-002

                      T品牌高灵敏逆转录酶

      实验仪器:ABI Step One Plus

      实验体系及程序:按说明书推荐

    图1 RTM-002与T品牌逆转录性能对比

    Fig.1 Comparison of reverse transcription ability bewteen RTM-002 and supplier T


      以MS2RNA为模板,稀释MS2RNA到8ng及0.08ng两种添加量,逆转录产物稀释10倍后用QST-100进行定量PCR扩增,对比进口T品牌的高灵敏逆转录酶,及不添加RNase抑制剂对反应体系的影响。由图1可以看出,反应体系中必须添加RNase抑制剂,否则会对Cq值具有很大影响;对比T品牌的试剂,TOROIVD #RTM-002在低模板具有更好的逆转录效率,且△△Cq更接近理论值,即TOROIVD #RTM-002更适合△△Cq法为基础的基因表达分析。


    █ RTM-002高温逆转录活性测试

      实验材料:MS2RNA

                       TOROIVD #QPT-200U

                       TOROIVD #RTM-002

      实验仪器:博日LineGine9600

      实验体系及程序:按说明书推荐


    图2 RTM-002高温逆转录活性测试

    Fig.2  Activity of reverse transcriptional test of RTM-002 for high temperature


      以MS2RNA为模板,稀释MS2RNA到1000copies、100copies、100copies、1copies,使用TOROIVD #QPT-200U和RTM-002设置一步法反应程序,采用温度梯度设置从50-60℃的温度梯度。由图2可以看出,在1000copies模板浓度范围内,逆转录从50-60℃所得到的Cq值波动范围在1之内,说明TOROIVD #RTM-002具有宽广的高温逆转录活性范围。



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