高效率高温逆转录酶
高效率高温逆转录酶 TOROIVD® Ⅲ Reverse Transcriptase |
TOROIVD® III Reverse Transcriptase是由M-MLV逆转录酶突变改造而来的高效率逆转录酶。去除了RNaseH活性,提高了延伸性、灵敏度、扩增效率和高温反应性。可应用于RT-qPCR、长片段cDNA克隆、cDNA文库构建、低拷贝RNA的cDNA合成。
高灵敏度:配合TOROIVD® 5G DNA Polymerase系列使用,灵敏度可达3 copies/反应。
宽范围逆转录活性:在37~60℃宽温度范围内具有一致的逆转录活性。
高热稳定性:突变改造及稳定剂使得保存稳定,37℃孵育一周性能保持不变。
1. 宽逆转录活性范围:
以1、10、100、1000拷贝的MS2RNA为模板,使用RTM-002和QPT-200设置一步法RT-qPCR反应体系,采用温度梯度功能从37-62℃设置逆转录温度梯度,结果如图所示,在37-62℃逆转录温度下所得到的Cq值数值波动在1之内,说明RTM-002具有宽泛的高温逆转录活性范围。
2. 高灵敏度:
以0.5、5、50及500copies/μL的MS2RNA为为模板,在每25μL反应体系中添加5μL模板,配合MFP-207及RNase抑制剂进行一步法RT-qPCR,结果如图所示,即使低至2.5copies/反应的模板仍可稳定检出,说明RTM-002具有高灵敏度,可以进行低模板浓度病毒及mRNA的检测。
组分货号 | 组分名称 | 包装规格 | 目录价格 | 保存温度 |
RTM-002-10KU | TOROIVD® Ⅲ Reverse Transcriptase | 10KU/0.1ML | 200元 | -20℃ |
RTM-002-100KU | TOROIVD® Ⅲ Reverse Transcriptase | 100KU/1ML | 1500元 | -20℃ |
-20℃条件下可保存2年,2-8℃条件下保存1个月,避免反复冻融。
█ RTM-002与T品牌逆转录性能对比
实验材料:MS2RNA
TOROIVD #QST-100
TOROIVD #RTM-002
T品牌高灵敏逆转录酶
实验仪器:ABI Step One Plus
实验体系及程序:按说明书推荐
图1 RTM-002与T品牌逆转录性能对比
Fig.1 Comparison of reverse transcription ability bewteen RTM-002 and supplier T
以MS2RNA为模板,稀释MS2RNA到8ng及0.08ng两种添加量,逆转录产物稀释10倍后用QST-100进行定量PCR扩增,对比进口T品牌的高灵敏逆转录酶,及不添加RNase抑制剂对反应体系的影响。由图1可以看出,反应体系中必须添加RNase抑制剂,否则会对Cq值具有很大影响;对比T品牌的试剂,TOROIVD #RTM-002在低模板具有更好的逆转录效率,且△△Cq更接近理论值,即TOROIVD #RTM-002更适合△△Cq法为基础的基因表达分析。
█ RTM-002高温逆转录活性测试
实验材料:MS2RNA
TOROIVD #QPT-200U
TOROIVD #RTM-002
实验仪器:博日LineGine9600
实验体系及程序:按说明书推荐
图2 RTM-002高温逆转录活性测试
Fig.2 Activity of reverse transcriptional test of RTM-002 for high temperature
以MS2RNA为模板,稀释MS2RNA到1000copies、100copies、100copies、1copies,使用TOROIVD #QPT-200U和RTM-002设置一步法反应程序,采用温度梯度设置从50-60℃的温度梯度。由图2可以看出,在1000copies模板浓度范围内,逆转录从50-60℃所得到的Cq值波动范围在1之内,说明TOROIVD #RTM-002具有宽广的高温逆转录活性范围。
工厂地址: 江苏如东珠江路888号生命健康园20号楼
电话:+86-21-68030217/33782006/33782046
邮箱:market@toroivd.com