低宿主基因组残留的探针法qPCR预混液
低宿主基因组残留探针法qPCR预混液 TOROIVD® 5G qPCR Premix SS with UNG |
特别说明: 本品仅限于科学研究及实验室自检,不可直接用于诊断。
TOROIVD® 5G qPCR Premix SS with UNG是一种可快速扩增的2×qPCR预混液,可进行五重qPCR分析。该预混液TOROIVD® 5G DNA聚合酶、dNTP、dUTP、UNG和反应缓冲液,最低可检测2-3拷贝的靶标DNA。突变的5G聚合酶和缓冲液的双重优化使得对PCR抑制剂具有抵抗能力,且在室温下具有高稳定性。该预混液采用dUTP/UNG防污染系统,可降低PCR产物的交叉污染风险。和QPT-200U相比,清除了酶体系中大肠杆菌宿主DNA,最大程度降低了宿主DNA对qPCR体系的干扰。
高速高灵敏:可使用探针法快速地检测低至2-3拷贝水平的DNA病毒或cDNA。
低宿主核酸残留:清除了酶体系中大肠杆菌宿主DNA,最大程度降低了宿主DNA对qPCR体系的干扰。
防污染系统:含有dUTP/UNG,可室温清除PCR扩增产物的污染。
室温稳定:在储存和运输过程中,性能不容易随温度变化而降低;完全室温配制体系。
1. 低宿主基因组残留:采用大肠杆菌23S rDNA引物探针进行NTC扩增,QPT-200U有明显基因组DNA残留,QPT-200U-SS无基因组DNA残留。
2. 客户项目验证:针对客户某些项目,QPT-200U-SS呈现更好的扩增性能,可能是宿主基因组DNA残留的影响。
3. 超高耐热性:55℃热加速7天和-20℃保存性能完全一致。
名称:TOROIVD® 5G qPCR Premix SS with UNG (中文名:低宿主基因组残留探针法qPCR预混液)
货号: QPT-200U-SS
规格: 20µL×500次
组分货号 | 组分名称 | 包装规格 | 目录价 | 保存温度 |
QPT-200U-SS | TOROIVD® 5G qPCR Premix SS with UNG (中文名:低宿主基因组残留探针法qPCR预混液) | 1.25 mL×4管/包 | 1500元 | 2-8℃ 保存一年 |
试剂盒于-20℃长期保存,在 2℃-8℃可保存 1 年,使用前请完全融化。
1. 问:该试剂适用哪些种型号的仪器?
答: 已经验证的仪器包括Roche LightCycler 96,ABI Step One Plus,西安天隆 Gentier 96R和Gentier 48E,杭州博日LineGene 9600 Plus, Biorad CFX 96,ABI QuantStudio 1,杭州柏恒Q1600及宏石SLAN-96S 等实时荧光定量PCR检测系统;其它仪器未验证,我们可以配合验证。
2. 问:能否兼容其它试剂的循环条件?
答: 我司试剂能兼容绝大部分其它试剂的循环条件,但是要来电咨询是否可以完全替代。
3. 问:能否兼容其它快速仪器的快速循环条件?
答: 我司能兼容绝大部分快速循环条件,但是各个快速仪器的控制温度精度及采光有差异,请来电咨询协助微调优化。
4. 问:试剂可以在-20℃保存吗?
答:试剂在-20℃保存三年以上,但是每次使用时需要完全室温融化,不可有任何结晶,否则影响性能。所以为了使用方便,建议 2-8℃稳定保存一年。
5. 问:荧光曲线前期基线期不平整,有波动。
答:试剂未完全解冻,需于室温静置 30min 使其完全恢复至室温。模板与体系未完全混匀,加样时将模 板加入液面以下。
6. 问:荧光曲线未出现平台期。
答:优化引物探针设计和引物探针使用浓度。
1. QPT-200U-SS热稳定性验证
以非洲猪瘟病毒B636L基因(编码VP72蛋白)的质粒为模板,以世界动物卫生组织公布的序列合成引物探针,采用分别37℃温控7天,15天的QPT-200U-SS进行扩增,以-20℃保存的QPT-200U-SS为对照,实验体系及程序按说明书推荐,结果如下图:
图1 QPT-200-SS经37℃热加速7天的稳定性比较 | 图2 QPT-200-SS经37℃热加速15天的稳定性比较 |
结果:由图,QPT-200-SS经过37℃分别热加速7天和15天后与-20℃保存的性能无差异。
结论:QPT-200-SS可在15天内室温进行运输,可与2-8℃进行保存,体现了极强的热稳定性,降低了运输成本,提高了使用简便性。
2. QPT-200U-SS抗抑制能力检测
以世界动物卫生组织公布的序列合成引物探针,剪取米粒大小(50mg左右)猪组织样品置于含1mL裂解液(含5%TritonX-100 TE 缓冲液)的研磨管中,加入研磨珠在小型组织研磨器研磨3min;离心上清取5µL用QPT-200U-SS检测。实验体系及程序按说明书推荐,结果如下图:
图3 QPT-200-SS直扩性能验证
结果:QPT-200U-SS扩增结果曲线一致,表明结果正常。
结论:QPT-200U-SS在模板未经提取的情况下仍能正常扩增,体现了很强的抗抑制能力,可用于样品的直扩。
3. QPT-200U-SS多重PCR扩增检测
以客户提供实际样品为模板,以世界动物卫生组织公布的序列合成引物探针,用QPT-200U-SS检测非瘟/野毒/疫苗毒/内参,共四通道验证,实验体系及程序按说明书推荐,结果如下图:
图4 QPT-200-SS扩增四重引物探针mix
结果:QPT-200U-SS扩增结果,四通道曲线正常,表明结果准确。
结论:QPT-200U-SS在四重引物探针作用下均能正常扩增,提高检测效率,表明QPT-200U-SS可用于多重PCR扩增。
工厂地址: 江苏如东珠江路888号生命健康园20号楼
电话:+86-21-68030217/33782006/33782046
邮箱:market@toroivd.com