强力清除PCR扩增产物污染
强力清除PCR扩增产物污染 Heat-labile Uracil N-Glycosylase |
特别说明: 本品仅限于科学研究及实验室自检,不可直接用于诊断。
Heat-labile Uracil N-Glycosylase(热敏UNG酶或UDG酶)是经大肠杆菌表达的重组蛋白。可催化水解DNA单链或双链的尿嘧啶碱基和糖磷酸骨架的N-糖苷键,释放游离尿嘧啶,由此DNA单链或双链上产生的dU碱基位点很容易被水解而断裂;该酶对RNA和dT-DNA无活性,可清除使用dUTP体系的PCR产物。非热敏UNG酶难灭活,残留活性会降解含dU产物,影响PCR扩增。本品可在室温作用,且对温度敏感、易于灭活,≥50℃即可使该酶不可逆失活。室温配制体系时即可清除PCR产物,适用于PCR、qPCR、RT-PCR及RT-qPCR体系,降低核酸检测的假阳性。
防污染能力强:可有效清除含dU的PCR扩增产物,有效避免核酸检测假阳性。
使用方便:室温体系配制时即可清除,≥50℃逆转录过程即可失活,无需额外步骤。
低扩增抑制:热敏易灭活,对RNA和dT-DNA无活性且≥50℃可完全失活,对逆转录及PCR扩增无影响。
UNG002-YL与K 品牌UNG酶防污染能力对比:以MS2RNA为模板,使用TOROIVD® Probe 1-step RT-qPCR 5G Kit(TOROIVD # QPR-303)预混液进行扩增,再将PCR产物进行纯化作为模板(含U和T)。
当扩增体系中不添加UNG002YL或其他品牌UNG酶时,结果如图a所示,PCR产物污染可大量扩增;
当扩增体系中分别添加UNG-002YL和K品牌UNG酶,结果如图b所示,K品牌不能完全清除,仍有明显的扩增曲线;
而UNG-002YL可完全清除高浓度PCR扩增产物。
实验结果说明:与市场上同类产品相比,TOROIVD的UNG002-YL防污染能力更强。
本试剂组产品货号: UNG002YL-1mL, UNG002YL-100mL
组分货号 | 组分名称 | 包装规格 | 数量 | 目录价格 |
UNG002YL-1mL | Heat-labile Uracil N-Glycosylase | 1mL/管,1KU | 1 管 | 750元 |
UNG002YL-100mL | Heat-labile Uracil N-Glycosylase | 100mL/瓶,100KU | 1瓶 | 来电询价 |
-15~-20℃条件下可保存2年,避免反复冻融。
请使用干冰或-15~-20℃冷链运输。
1. 问:贵司酶使用时的注意事项?
答:(1)推荐用量:50μLPCR 反应体系中加入0.2-0.6μL,实际使用量根据具体实验进行改进和优化;
(2)UNG002YL消化防污染:PCR反应体系37℃ 2-10 min,可以根据实验的需要进行调整;
(3)正常启动 PCR 程序。
UNG-002YL时与K品牌防污染能力对比
实验材料:使用1-Step RT-qPCR试剂扩增MS2RNA的PCR产物
实验仪器:ABI7500
实验体系及程序:按说明书推荐
图1 UNG-002YL时与K品牌防污染能力对比
Fig.1 Anti-pollution capacity bewteen UNG002YL and supplier K
以MS2RNA为模板,使用TOROIVD® Probe 1-step RT-qPCR 5G Kit(TOROIVD #QPR-303)预混液进行扩增,再将PCR产物进行纯化作为模板(含U和T)。
图1-A:扩增中不添加UNG002YL时,PCR产物污染可大量扩增。
图1-B:添加UNG-002YL和K品牌UNG酶同时对比清除效果,K品牌不能完全清除,UNG-002YL可完全清除高浓度的PCR产物污染。
工厂地址: 江苏如东珠江路888号生命健康园20号楼
电话:+86-21-68030217/33782006/33782046
邮箱:market@toroivd.com