高速高灵敏高特异防污染探针一步法RT-qPCR试剂盒
高速高灵敏高特异防污染探针一步法RT-qPCR试剂盒 TOROIVD® Probe 1-step RT-qPCR 5G kit 3.0 |
TOROIVD® Probe 1-step RT-qPCR 5G Kit 3.0可在单管内同时进行高灵敏高重复的多重RT-qPCR分析,能检测多达5个RNA/DNA靶点。该试剂盒采用TaqMan®探针检测病毒,包括UNG酶、dsDNase酶、耐高温MMLV逆转录酶、RNase抑制剂、TOROIVD® 5G DNA聚合酶和反应缓冲液。改进的酶提高了对PCR抑制剂的高耐受性和在酶自身的热稳定性。该一步试剂由于其反应设置简单,适用于高通量分析。该试剂盒适用于高速RT-qPCR,可实现对目标的准确检测和定量有可能在广泛的动态范围内获得高可重复性和可靠的实时PCR结果。
高速高灵敏:本试剂可进行高速PCR分析,配合高速PCR仪时间可以缩短到30min以内,适合分子POCT用途。
多重 RT-qPCR:本试剂已经验证可进行五重RT-qPCR分析,实现单管内同时分析多个靶标或内标,降低试剂成本及提高分析效率。
直接 RT-qPCR:本试剂中含有高抗抑制能力强的改造型聚合酶,结合调优过的反应缓冲系统,可以根据不同的样品类型开发RNA免提取的直接RT-qPCR系统,从而缩短检测时间。
强防污染:含有dUTP/UNG酶防污染系统,可有效清除PCR扩增产物污染。
1. 清除污染能力:使用含U的PCR产物对比QPR-300和QPR-304UD扩增,QPR-304UD完全清除含U的PCR产物污染。
2. 全血直扩能力:对QPR-304UD体系添加5%的全血进行直接扩增,对扩增无影响。
3. 多重PCR:可高效地进行四重qPCR扩增。
组分货号 | 组分名称 | 包装规格 | 数量 | 保存温度 |
QPR303UD13 | RT-qPCR Enzyme MixUD | 260μL/管 | 1管/袋 | -25- -15℃ 避光保存两年 |
ASF101GB | 2×5G qPCR Buffer GB | 1.25mL/管 | 2管/袋 | -25- -15℃ 避光保存两年 |
1.试剂盒-20℃冷冻保存,有效期24个月。运输过程中,温度应为-15℃到-25℃冷链。
2.试剂开封后,置于4℃条件下保质期为60天,-20℃条件下保质期为24个月。
3.2×5G qPCR Buffer BB请室温完全融化后使用,否则会降低使用效果。
1.问:我司原诊断试剂盒的酶和缓冲液部分更换为贵司试剂后,为何灵敏度不如原试剂盒?
答:本公司的核心PCR酶是基于TTH DNA聚合酶改造而成,其Taqman探针切割活性及聚合酶活性均大大得到提升,二者活性比发生了变化。所以大部分场合下,原Taq酶体系的最优引物探针浓度并不适合我司的酶体系,所以必须通过<引物探针浓度正交筛选>重新筛选最优引物探针浓度组合。
2.问:针对超过五重以上的多重 PCR,如何提高筛选效率?
答:建议此时使用以前的引物探针浓度,使用10-50 拷贝/反应进行测试与原体系对比或分析灵敏度状况。固定灵敏度符合要求的引物探针浓度后再使用<引物探针浓度正交筛选>筛选不合要求的引物探针组合,直到全部最优为止。
3.问:贵司酶的混合液是否兼容其它公司的PCR缓冲液?
答:本公司根据我司的酶的氨基残基特性进行了专门优化,其它公司的PCR缓冲液系统一般不能将我司的酶发挥到最优性能,故不建议使用其它PCR缓冲液。
4.问:酶体系中双链核酸酶会不会影响DNA模板检测灵敏度?
答:酶体系中微量双链核酸酶是为了去除酶体系中的潜在污染,一旦和缓冲液混合配制成引物探针预混液后,该微量双链核酸酶已经完全失活。所以继续添加模板时,不会对DNA模板造成影响。另外该核酸酶仅仅对双链 DNA 具有活性RNA、cDNA及单链DNA不会产生活性。
█ QPR-304UD灵敏度测试
实验材料:上海计量院提供的SARS-CoV-2标准品
TOROIVD QPR-304UD
实验仪器:博日LineGine9600
实验体系及程序:按说明书推荐
图1 QPR-304UD灵敏度测试
Fig.1 Sensitivity test of QPR-304UD
以上海计量院提供的SARS-CoV-2标准品为模板,使用TOROIVD® Probe 1-step RT-qPCR 5G Kit 3.0(TOROIVD #QPR-304UD) 预混液按照说明书所推荐的条件及体系进行实验,对SARS-CoV-2的N基因和ORF1ab基因进行低拷贝扩增。结果显示,TOROIVD #QPR-304UD可稳定检测2-3copies高灵敏度扩增SARS-CoV-2 ,这表明TOROIVD #QPR-304UD预混液灵敏度高。
█ QPR-304UD热稳定性测试
实验材料:MS2RNA
TOROIVD #QPR-304UD
实验仪器:CFX96
实验体系及程序:按说明书推荐
图2 QPR-304UD热稳定性测试
Fig.2 Stability test of QPR-304UD
以MS2RNA为模板,实验组:
A:QPR-304UD 酶混合液,分别在-20℃冰箱和37℃金属浴保存7天。
B:QPR-304UD 酶混合液中 260ul 中加入END-UD13酶混合液稀释液40ul 充分混合,分别在-20℃冰箱和 37℃金属浴保存7天。25ul 反应体系中酶混合液添加量提升为 1.5ul。
C:QPR-304UD酶混合液中 260ul 中加入END-UD13酶混合液稀释液240ul 充分混合,分别在-20℃冰箱和37℃金属浴保存7天。25ul 反应体系中酶混合液添加量提升为 2.5ul。
由图2可看出,QPR-304UD经过 37℃热加速后性能保持不变,通过添加 END-UD13酶混合液稀释液提升酶混合液添加量到1.5ul或2.5ul时,依然保持优良的热稳定性。
工厂地址: 江苏如东珠江路888号生命健康园20号楼
电话:+86-21-68030217/33782006/33782046
邮箱:market@toroivd.com