1. 问：QST-300 熔解曲线出现非特异性扩增？
答：反复冻融会使得 QST-300 的稳定性下降，从而导致非特异性扩增的产生，应尽量避免试剂反复冻融。
2. 问：使用 QST-300 时可以更改加样体系吗？
答：该试剂为 2×预混液，使用量为反应总体系的一半，引物和模板的加样量可进行调节，最后加水补足即可。
3. 问：反应结束时无扩增曲线应该如何处理？
答：（1）反应循环数不够：一般设置循环数为 40，但需要注意的是过多的循环会增加过多的背景信号，降低数据可信度。
（2）确认程序中是否设置了信号采集步骤：两步法扩增程序一般将信号采集设置在退火延伸阶段；三步法扩增程序应当将信号采集设置在 72℃ 延伸阶段。
（3）引物不合适：重新设计引物；确认引物是否降解：长时间未用的引物应先通过 PAGE 电泳检测完整性，以排除其降解的可能。
（4）模板浓度太低：减少稀释度重复实验，一般未知浓度的样品先从最高浓度做起。
（5）模板降解：重新制备模板，重复实验。
4. 问：重复性差应该如何处理？
答：（1）将模板做 5-10 倍稀释，以大体积加入反应体系中。
（2）定量 PCR 仪不同位置温度控制不一致。定期校准仪器。
（3）模板浓度太低。模板浓度越低，重复性越差，提高模板的加样体积。
（4）做 4-6 个复孔，删除其中重复性不好的孔，剩余的进行后续计算。
