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  • TOROGreen® 5G qPCR Premix
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    高速高灵敏染料法定量 PCR Mix


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    商品描述

    高速高灵敏染料法定量 PCR Mix




     高速高灵敏染料法定量 PCR Mix


     TOROGreen® 5G qPCR Premix

          特别说明: 本品置于 -20℃ 保存,需在室温融化和加样。              

      高速高灵敏:采用高速 TOROIVD® 5G Polymerase 2.0 和快速热启动的化学修饰技术,实现低拷贝靶标的快速、高灵敏度定量。

      高抗抑制能力:本试剂经过特殊优化,即使在 PCR 抑制剂存在的情况下,如 EDTA、肝红素或血红素,也具有卓越的扩增能力,特别适合粗样品扩增。

      宽泛的定量线性范围,兼容多个平台:至少8个浓度梯度下具有极高地扩增效率,为模板浓度提供广泛的线性区间。 

    性能指标

      1. 超高速扩增

      将 pET28a  质粒进行 8 个 10 倍梯度稀释作为模板,使用 QST-300P 对稀释好的模板进行定量实验,仪器型号为 CFX96(BioRad),超高速扩增程序设定如图 1-a 所示,扩增曲线和标准曲线如图 1-b 和 1-c 所示:

    图1 超高速扩增

    Fig.1 Ultra high-speed amplification

                                                             

                                                   

      结果:从扩增曲线中可以看到,8个浓度梯度明显分开,从标准曲线中可以看到,扩增效率为 102.4%,R2值为 1。

      结论:在超高速扩增循环条件下 QST-300 仍然具有极好的线性范围和绝佳的扩增效率。

      TOROGreen® 5G qPCR Premix 是基于 SYBR Green I 染料法的 2×预混液,包含了除引物和模板外的所有组分。本产品采用进化改造的化学修饰热启动 Tth DNA 聚合酶,可进行高速度、高灵敏的定量 PCR 分析。通过酶的改造及配方双重优化使得该试剂具有高抗抑制性,可对样品直接扩增。该试剂中已预混 ROX,无需单独添加,兼容大部分定量 PCR 仪,同时添加了蓝色指示剂,方便加样操作。 


    组分货号

    组分名称

    包装规格

    数量

    保存温度

    QST-300P

    TOROGreen® 5G qPCR Premix

    1.25 mL/管

    4 管

    -20℃ 保存两年


      -20℃ 保存两年。


    1. 问:QST-300 熔解曲线出现非特异性扩增?

        答:反复冻融会使得 QST-300 的稳定性下降,从而导致非特异性扩增的产生,应尽量避免试剂反复冻融。


    2. 问:使用 QST-300 时可以更改加样体系吗?

        答:该试剂为 2×预混液,使用量为反应总体系的一半,引物和模板的加样量可进行调节,最后加水补足即可。


    3. 问:反应结束时无扩增曲线应该如何处理?

        答:(1)反应循环数不够:一般设置循环数为 40,但需要注意的是过多的循环会增加过多的背景信号,降低数据可信度。

               (2)确认程序中是否设置了信号采集步骤:两步法扩增程序一般将信号采集设置在退火延伸阶段;三步法扩增程序应当将信号采集设置在 72℃ 延伸阶段。

               (3)引物不合适:重新设计引物;确认引物是否降解:长时间未用的引物应先通过 PAGE 电泳检测完整性,以排除其降解的可能。

               (4)模板浓度太低:减少稀释度重复实验,一般未知浓度的样品先从最高浓度做起。

               (5)模板降解:重新制备模板,重复实验。


    4. 问:重复性差应该如何处理?

        答:(1)将模板做 5-10 倍稀释,以大体积加入反应体系中。

               (2)定量 PCR 仪不同位置温度控制不一致。定期校准仪器。

               (3)模板浓度太低。模板浓度越低,重复性越差,提高模板的加样体积。

               (4)做 4-6 个复孔,删除其中重复性不好的孔,剩余的进行后续计算。


    TOROGreen® 5G qPCR Premix.pdf


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