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  • TOROIVD ® 5G qPCR Premix with UNG
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  • TOROIVD ® 5G qPCR Premix with UNG

    高速高灵敏防污染探针法qPCR预混液

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    商品描述

    高速高灵敏防污染探针法qPCR预混液


     高速高灵敏防污染探针法qPCR预混液


     TOROIVD® 5G qPCR Premix with UNG

          特别说明: 本品仅限于科学研究及实验室自检，不可直接用于诊断。              


    　　高速高灵敏：该试剂盒可以通过探针实现对低拷贝靶点的快速、高灵敏度定量，适用于 DNA 病毒或低水平表达的 mRNA 逆转录产物的定量。

    　　可以进行多重引物探针扩增：该试剂盒经过验证，可同时检测多个目的基因，允许同时检测其它通道 以提高效率或质量控制目的。

    　　高耐受性：该试剂盒独特的专有配方即使在存在通常会抑制 PCR 的物质（如肝素、血红素或 EDTA） 的情况下也能提供强大的性能，从而增加您在处理各种复杂临床样本时的信心。

    　　与 DNA 兼容的宽泛动态范围：该试剂盒经过优化，可提供用于 DNA 靶标的高特异性和动态范围。这种输入灵活性有助于简化实验室中不同工作流程的数量，从而提高效率。

    　　避免污染：该试剂盒在反应缓冲液中含有 dUTP 和 UNG。可以去除 PCR 产物造成的交叉污染，从而降低假阳性率。


     1. QPT-200U灵敏度验证

    　　以非洲猪瘟病毒B636L基因（编码VP72蛋白）的质粒为模板，以世界动物卫生组织公布的序列合成引物探针，采用QPT-200U进行扩增，实验体系及程序按说明书推荐，结果如下图。


    图1  QPT-200U扩增非洲猪瘟病毒灵敏度验证扩增曲线图2  QPT-200U扩增非洲猪瘟病毒灵敏度验证标准曲线


              结果：当模板拷贝数来到个位数时，QPT-200U都能稳定扩增。

              结论：QPT-200U可稳定检测3-4copies/反应中的非洲猪瘟病毒，具有极高的扩增效率和灵敏度。


     2. QPT-200U热稳定性验证

    　　以非洲猪瘟病毒B636L基因（编码VP72蛋白）的质粒为模板，以世界动物卫生组织公布的序列合成引物探针，采用分别37℃温控15天，30天的QPT-200U进行扩增，以-20℃保存的QPT-200U为对照，实验体系及程序按说明书推荐，结果如下图：

    图3  QPT-200U经37℃热加速15天的热稳定性比较图4  QPT-200U经37℃热加速30天的热稳定性比较


    　　结果:  QPT-200U经过37℃热加速15天后和-20℃保存的性能无差异（图3），经过37℃热加速30天后和-20℃保存的相比，仅落后0.5 Ct（图4）。

    　　结论：QPT-200U可在15天内室温进行运输，可与2-8℃进行保存，体现了极强的热稳定性，降低了运输成本，提高了使用简便性。


     3. QPT-200U与多竞品在B集团的梯度稀释检测限比较

              以非洲猪瘟病毒B636L基因（编码VP72蛋白）的质粒为模板，客户将QPT-200U与其余厂家试剂对比测试低浓度模板梯度稀释的检出限，结果如下表。

    稀释倍数

    TOROIVD

    进口T品牌

    国产N品牌

    国产T品牌

    国产K品牌

    20

    30.40

    29.66

    31.91

    32.11

    34.69

    35.63

    36.60

    36.00

    33.75

    33.65

    21

    32.73

    32.93

    33.75

    33.79

    36.65

    36.67

    38.70

    39.35

    34.82

    33.32

    22

    34.29

    33.61

    34.68

    35.14

    37.11

    35.60

    38.81

    39.22

    35.57

    37.43

    23

    35.13

    35.74

    35.40

    35.79

    37.79

    39.00

    39.29

    37.83

    36.85

    38.07

    24

    35.79

    36.55

    37.94

    37.94

    39.55

    39.86

    38.55

    40.53

    37.55

    37.07

    25

    39.56

    38.00

    36.15

    36.72



    -

    40.32

    -

    39.28

    26

    36.79

    36.82

    -

    38.00



    -

    40.29



     27

    38.61

    37.62










    表1 QPT-200U与多竞品最低检出限比较

    　　结果：如表1所示最低检出限顺序为：TOROIVD(27) > 进口T品牌(25) > 国产T品牌(24) > 国产K品牌(24) > 国产N品牌(24)。

    　　结论: TOROIVD与行业竞品相比具有领先的最低检出限，最大程度避免非洲猪瘟漏检。


     4. QPT-200U抗抑制能力检测

              以世界动物卫生组织公布的序列合成引物探针，剪取米粒大小（50mg左右）猪组织样品置于含1mL裂解液（含5%TritonX-100 TE 缓冲液）的研磨管中，加入研磨珠在小型组织研磨器研磨3min；离心上清取5uL用QPT-200U检测。实验体系及程序按说明书推荐，结果如下图。


     

    图5  QPT-200U直扩性能验证

              结果：QPT-200U扩增结果曲线一致，表明结果正常。 

              结论：QPT-200U在模板未经提取的情况下仍能正常扩增，体现了很强的抗抑制能力，可用于样品的直扩。

     

     5. QPT-200U与进口T品牌快速条件比较

              以非洲猪瘟病毒B636L基因（编码VP72蛋白）的质粒为模板，以世界动物卫生组织公布的序列合成引物探针，采用在天隆96R上采用普通条件，天隆48E上采用快速条件，分别于进口T品牌进行对比，结果如下图。


    循环步骤

    天隆96R普通条件

    天隆48E快速条件

    预变性

    95℃

    5min

    95℃

    3min

    PCR扩增

    95℃

    10秒

    95℃

    5秒


    60℃

    20秒

    60℃

    10秒

    PCR扩增

    升降温设为5℃/秒，51min

    升降温设为8℃/秒，33min

    表2 天隆96R和48E仪器条件设置


     

    图6  在普通条件和快速条件下比较QPT-200U和进口T品牌的性能

    　　结果：从Ct值上来看，QPT-200U无论使用天隆96R普通实验条件，还是使用48E快速条件，Ct值差异不大，在Ct值0.5的实验误差范围以内，而进口T品牌在快速条件下差异3个Ct以上，明显性能下降。

    　　结论：QPT-200U比T品牌具有更高的扩增速度，可使用天隆48E快速实验条件，将检测时间缩短到33min以内。而T品牌产品不适合快速扩增。

    　　特别备注：如果使用48E超快反应程序，仅需27min


     6. QPT-200U多重PCR扩增检测

    　　以客户提供实际样品为模板，以世界动物卫生组织公布的序列合成引物探针，用QPT-200U检测非瘟/野毒/疫苗毒/内参，共四通道验证，实验体系及程序按说明书推荐，结果如下图：


     

    图7  QPT-200U扩增四重引物探针mix

    　　结果:  QPT-200U扩增结果，四通道曲线正常。 

    　　结论: QPT-200U在四重引物探针作用下均能正常扩增，提高检测效率，表明QPT-200U可用于多重PCR扩增。

    　　TOROIVD® 5G qPCR Premix with UNG是一种快速的2×预混液，可对多达五个DNA靶标进行灵敏、可重复的检测。特别适用于使用探针法进行病毒检测，该混合物包括 TOROIVD® 5G DNA 聚合酶、UNG 酶、dNTPs 和反应缓冲液。改进的酶和反应混合物的组合还可以实现对PCR抑制剂的抗抑制能力和室温下的高稳定性。该混合物适用于高通量分析，在 UNG 酶的作用下，可以降低交叉污染的风险。该预混液适用于高速 qPCR，可准确检测和定量靶标，从而在宽泛的线性范围内获得高度可重复且可靠的实时 PCR 结果。


    　　名称：TOROIVD® 5G qPCR Premix with UNG

    　　货号:   QPT-200U

    　　规格:   20µL×500次


    组分货号

    组分名称

    包装规格

    数量

    保存温度

    QPT-200U

    TOROIVD® 5G qPCR Premix with UNG 

    (中文名：高速高灵敏防污染探针法qPCR预混液)

    1.25mL/管

    4 管

     2-8℃

    保存一年


    　　试剂盒于-20℃长期保存，在 2℃-8℃可保存 1 年，使用前请完全融化




    1. 问：该试剂适用哪些种型号的仪器？

    　

        答: 已经验证的仪器包括Roche LightCycler 96，ABI Step One Plus，西安天隆 Gentier 96R和Gentier 48E，杭州博日LineGene 9600 Plus， Biorad CFX 96，ABI QuantStudio 1，杭州柏恒Q1600及宏石SLAN-96S 等实时荧光定量PCR检测系统；其它仪器未验证，我们可以配合验证。


    2. 问：能否兼容其它试剂的循环条件？


        答: 我司试剂能兼容绝大部分其它试剂的循环条件，但是要来电咨询是否可以完全替代。


    3. 问：能否兼容其它快速仪器的快速循环条件？


        答: 我司能兼容绝大部分快速循环条件，但是各个快速仪器的控制温度精度及采光有差异，请来电咨询协助微调优化。


    4. 问：试剂可以在-20℃保存吗?


        答：试剂在-20℃保存三年以上，但是每次使用时需要完全室温融化，不可有任何结晶，否则影响性能。所以为了使用方便，建议 2-8℃稳定保存一年。


    5. 问：荧光曲线前期基线期不平整，有波动。


        答：试剂未完全解冻，需于室温静置 30min 使其完全恢复至室温。模板与体系未完全混匀，加样时将模 板加入液面以下。


    6. 问：荧光曲线未出现平台期。

        

        答：优化引物探针设计和引物探针使用浓度。


    QPT-200U的客户应用案例

     1. QPT-200U与多竞品在B集团的梯度稀释检测限比较


     2. QPT-200U与进口T品牌快速条件比较


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