特别说明: 本品仅限于科学研究及实验室自检，不可直接用于诊断。              

　　高速高灵敏：该试剂盒可以通过探针实现对低拷贝靶点的快速、高灵敏度定量，适用于 DNA 病毒或低水平表达的 mRNA 逆转录产物的定量。

　　可以进行多重引物探针扩增：该试剂盒经过验证，可同时检测多个目的基因，允许同时检测其它通道 以提高效率或质量控制目的。

　　高耐受性：该试剂盒独特的专有配方即使在存在通常会抑制 PCR 的物质（如肝素、血红素或 EDTA） 的情况下也能提供强大的性能，从而增加您在处理各种复杂临床样本时的信心。

　　与 DNA 兼容的宽泛动态范围：该试剂盒经过优化，可提供用于 DNA 靶标的高特异性和动态范围。这种输入灵活性有助于简化实验室中不同工作流程的数量，从而提高效率。

　　避免污染：该试剂盒在反应缓冲液中含有 dUTP 和 UNG。可以去除 PCR 产物造成的交叉污染，从而降低假阳性率。

 1. QPT-200U灵敏度验证

　　以非洲猪瘟病毒B636L基因（编码VP72蛋白）的质粒为模板，以世界动物卫生组织公布的序列合成引物探针，采用QPT-200U进行扩增，实验体系及程序按说明书推荐，结果如下图。

图1  QPT-200U扩增非洲猪瘟病毒灵敏度验证扩增曲线	图2  QPT-200U扩增非洲猪瘟病毒灵敏度验证标准曲线

          结果：当模板拷贝数来到个位数时，QPT-200U都能稳定扩增。

          结论：QPT-200U可稳定检测3-4copies/反应中的非洲猪瘟病毒，具有极高的扩增效率和灵敏度。

 2. QPT-200U热稳定性验证

　　以非洲猪瘟病毒B636L基因（编码VP72蛋白）的质粒为模板，以世界动物卫生组织公布的序列合成引物探针，采用分别37℃温控15天，30天的QPT-200U进行扩增，以-20℃保存的QPT-200U为对照，实验体系及程序按说明书推荐，结果如下图：

图3  QPT-200U经37℃热加速15天的热稳定性比较	图4  QPT-200U经37℃热加速30天的热稳定性比较

　　结果:  QPT-200U经过37℃热加速15天后和-20℃保存的性能无差异（图3），经过37℃热加速30天后和-20℃保存的相比，仅落后0.5 Ct（图4）。

　　结论：QPT-200U可在15天内室温进行运输，可与2-8℃进行保存，体现了极强的热稳定性，降低了运输成本，提高了使用简便性。

 3. QPT-200U与多竞品在B集团的梯度稀释检测限比较

          以非洲猪瘟病毒B636L基因（编码VP72蛋白）的质粒为模板，客户将QPT-200U与其余厂家试剂对比测试低浓度模板梯度稀释的检出限，结果如下表。

表1 QPT-200U与多竞品最低检出限比较

　　结果：如表1所示最低检出限顺序为：TOROIVD(2⁷) > 进口T品牌(2⁵) > 国产T品牌(2⁴) > 国产K品牌(2⁴) > 国产N品牌(2⁴)。

　　结论: TOROIVD与行业竞品相比具有领先的最低检出限，最大程度避免非洲猪瘟漏检。

 4. QPT-200U抗抑制能力检测

          以世界动物卫生组织公布的序列合成引物探针，剪取米粒大小（50mg左右）猪组织样品置于含1mL裂解液（含5%TritonX-100 TE 缓冲液）的研磨管中，加入研磨珠在小型组织研磨器研磨3min；离心上清取5uL用QPT-200U检测。实验体系及程序按说明书推荐，结果如下图。

图5  QPT-200U直扩性能验证

          结果：QPT-200U扩增结果曲线一致，表明结果正常。 

          结论：QPT-200U在模板未经提取的情况下仍能正常扩增，体现了很强的抗抑制能力，可用于样品的直扩。

 5. QPT-200U与进口T品牌快速条件比较

          以非洲猪瘟病毒B636L基因（编码VP72蛋白）的质粒为模板，以世界动物卫生组织公布的序列合成引物探针，采用在天隆96R上采用普通条件，天隆48E上采用快速条件，分别于进口T品牌进行对比，结果如下图。

表2 天隆96R和48E仪器条件设置

图6  在普通条件和快速条件下比较QPT-200U和进口T品牌的性能

　　结果：从Ct值上来看，QPT-200U无论使用天隆96R普通实验条件，还是使用48E快速条件，Ct值差异不大，在Ct值0.5的实验误差范围以内，而进口T品牌在快速条件下差异3个Ct以上，明显性能下降。

　　结论：QPT-200U比T品牌具有更高的扩增速度，可使用天隆48E快速实验条件，将检测时间缩短到33min以内。而T品牌产品不适合快速扩增。

　　特别备注：如果使用48E超快反应程序，仅需27min

 6. QPT-200U多重PCR扩增检测

　　以客户提供实际样品为模板，以世界动物卫生组织公布的序列合成引物探针，用QPT-200U检测非瘟/野毒/疫苗毒/内参，共四通道验证，实验体系及程序按说明书推荐，结果如下图：

图7  QPT-200U扩增四重引物探针mix

　　结果:  QPT-200U扩增结果，四通道曲线正常。 

　　结论: QPT-200U在四重引物探针作用下均能正常扩增，提高检测效率，表明QPT-200U可用于多重PCR扩增。

　　TOROIVD^® 5G qPCR Premix with UNG是一种快速的2×预混液，可对多达五个DNA靶标进行灵敏、可重复的检测。特别适用于使用探针法进行病毒检测，该混合物包括 TOROIVD^® 5G DNA 聚合酶、UNG 酶、dNTPs 和反应缓冲液。改进的酶和反应混合物的组合还可以实现对PCR抑制剂的抗抑制能力和室温下的高稳定性。该混合物适用于高通量分析，在 UNG 酶的作用下，可以降低交叉污染的风险。该预混液适用于高速 qPCR，可准确检测和定量靶标，从而在宽泛的线性范围内获得高度可重复且可靠的实时 PCR 结果。

　　名称：TOROIVD^® 5G qPCR Premix with UNG

　　货号:   QPT-200U

　　规格:   20µL×500次

　　试剂盒于-20℃长期保存，在 2℃-8℃可保存 1 年，使用前请完全融化